Неспецифические показатели иммунного статуса

(13 Голосов)
Рейтинг пользователей: / 13
ХудшийЛучший 

Характеристика лимфоидной системы.

1.  Определяют общее количество лимфоцитов при подсчете формулы крови. В норме их 20-26% среди других лейкоцитов (около 2000 клеток в 1 мм3 крови).

2. Подсчитывают процент и количество Т-лимфоцитов. Среди лимфоцитов крови в норме их 50-70% (1000-1400 клеток в 1 мм3 крови). Для этого подсчитывают количество лимфоцитов, образующих розетки с эритроцитами барана. К взвеси лейкоцитов добавляют равный объем 1% взвеси отмытых эритроцитов барана и инкубируют при 37°С 15 мин и ночь при 40°С;

-  осадок ресуспензируют, добавляют раствор глютарового альдегида до конечной концентрации 0,06% для фиксации розеток и сразу делают мазки,

-  мазки высушивают, фиксируют спиртом и окрашивают ядро красящими красителями (например, по Романовскому-Гимзе);

-  подсчитывают процент лимфоцитов, связавших более трех эритроцитов - Т-лимфоцитов.

В настоящее время Т-лимфоциты определяют с помощью моноклональных антител к CD-антигенам (CD2, CD3) в реакции иммунной флюоресценции с учетом результатов на проточном цитофотометре (норма 70-85%).

3. Определяют содержание Т-хелперов и Т-супрессоров с помощью моноклональных антител к CD4 (Тх) и CD8 (Тс) антигенам.

В норме Тх-35-48%, Тс-18-25%, соотношение Тх/Тс=1,4-2,0 - это иммунорегуляторный индекс. При заболеваниях этот индекс изменяется. Например, при СПИДе он уменьшается (0,04), т. к. угнетаются Тх (рецептором для вируса СПИДа является антиген Тх CD4). При аутоиммунных и аллергических заболеваниях индекс больше 2,0.

4. Для выявления активированных Т-клеток определяют рецептор к ИЛ-2 (CD25), HLA-DR антигены и CD71 (рецептор для трансферрина).

5. Определяют уровень интерлейкинов в крови.

Исследуют также функциональные показатели Т-лимфоцитов: пролиферативную активность (см. РБТЛ, РПМЛ), цитотоксическую активность. Показатели Т-лимфоцитов снижаются при Т-клеточных иммунодефицитах.

Характеристика В-лимфоцитов.

1. Общее количество В-лимфоцитов можно определить с помощью моноклональных антител к антигенам CD19-CD22, CD72. Применяют также антитела к иммуноглобулинам, которые находятся на поверхности В-лимфоцитов. В-лимфоциты составляют 20-25% всех лимфоцитов (600-800 клеток в 1 мм3 крови).

2. Функциональные продукты В-лимфоцитов - иммуноглобулины G, М, А классов в сыворотке крови и различных биологических жидкостях определяют с помощью реакции преципитации по Манчини. Для этого на одну стеклянную пластинку наливают 2% агар, смешанный с антителами против IgG; на вторую пластинку - с антителами против IgM, на 3-ю - против IgA. После застывания в агаре делают лунки диаметром 2 мм. В один ряд лунок каждой пластины вносят стандартную сыворотку с известной концентрацией IgG, IgM, IgA. В другие лунки добавляют исследуемые сыворотки крови больных. Иммуноглобулины диффундируют в агар и на месте встречи с антителами, которые находятся в агаре, образуется кольцо преципитации. Диаметр кольца зависит от концентрации Ig (чем больше Ig, тем больше диаметр). Измеряют диаметр зоны преципитации для стандартной сыворотки и по ней строят график зависимости диаметра кольца преципитации от количества Ig в сыворотке крови. Затем измеряют диаметр кольца преципитации исследуемой сыворотки, наносят на построенный график и определяют концентрацию иммуноглобулина. Для определения секреторного IgA (в слюне и др.) используют аналогичный метод в двух вариантах: определяют IgA (а-цепь) и его секреторный компонент с помощью соответствующих антител. В норме у взрослых: 0,8-2 г/л IgM; 8,0-13,0 г/л IgG; 1,4-3,0 г/л IgA. У новорожденных уровень IgG близок к материнскому, IgM и IgA имеются в следовых концентрациях. К 4-6 мес. уровень IgG падает до 5-6 г/л, а затем увеличивается. При нормальном развитии уровень иммуноглобулинов к 2-м годам у детей близок величинам их у взрослых.

Уровень секреторного IgA в слюне должен быть 0,03-0,4 г/л.

При иммунодефицитах уровень иммуноглобулинов снижается, а при стимуляции СИ и воспалении - повышается.

Характеристика системы макрофагов и гранулоиитов.

1.  Определяют количество лейкоцитов в крови и соотношение их видов (нейтрофилы, базофилы, эозинофилы, моноциты).

2. Оценивают поглотительную и переваривающую активность фагоцитов: к взвеси лейкоцитов или капле крови добавлять взвесь отмытой суточной культуры стафилококков или кишечной палочки. Готовят 3 пробы, инкубируют при 37°С 1-ю пробу 45 мин, 2-ю - 60 мин, 3-ю - 90 мин. Делают мазки, высушивают их, фиксируют этанолом и окрашивают по Романовскому.

Определяют фагоцитарный индекс и фагоцитарное число. Фагоцитарный индекс - это среднее количество частиц или микроорганизмов в одном фагоците (норма 3-8).

Фагоцитарное число - это количество фагоцитов, участвующих в фагоцитозе (норма - 60-80%).

Оценка показателей через разные промежутки времени позволяет оценить динамику фагоцитоза. В норме через 90 мин фагоцитарный индекс должен быть ниже, чем через 45 мин и 60 мин, в связи с перевариванием микробов. При нарушении переваривания он не меняется.

Переваривание микробов можно оценивать путем посева лизатов лейкоцитов на питательные среды и подсчета выросших колоний. Метод предполагает использование в качестве объекта фагоцитоза живых микроорганизмов. После инкубирования с микробами (см. выше) фагоциты осаждают центрифугированием, отмывают и лизируют. Их лизаты высевают на твердую питательную среду . Переваривающую активность фагоцитов оценивают по числу выросших колоний.

Метаболическую активность фагоцитов определяют после окраски их 0.25% раствором нитросинего тетразолия. В норме метохроматично (диффузно и в виде глыбок голубого цвета) окрашивается 15-18% нейгрофилов, при инфекциях их число увеличивается до 40% и более.

Показатели фагоцитов снижаются при соответствующих иммунодефицит, повышаются - при благоприятном течении инфекции.

3. С помощью моноклональных антител определяют антигены дифференцировки, активации и адгезии (CD14, CD11, CD18, HLA-DR и др.)

4. Выявляют рецепторы к СЗ компоненту комплемента, к иммуноглобулинам и др.

5. Оценивают спонтанную и направленную миграцию (хемотаксис).

6. Определяют способность секретировать цитокины (ИЛ-1, ФНО и др.) и их уровень в крови.

Характеристика системы комплемента.

1.  Определяют гемолитическую активность комплемента в реакции гемолиза с использованием гемолитической системы. Эта система состоит из эритроцитов барана, обработанных гемолитической сывороткой.

Определение комплемента основано на способности продуктов его активации вызывать лизис эритроцитов, покрытых антителами. По степени гемолиза судят о гемолитической активности комплемента.

В качестве единицы измерения комплемента используется 50% единица (СН50) - количество комплемента, вызывающее 50%-ный лизис 0.5.мл стандартной суспензии сенсибилизированных эритроцитов при температуре 37°С в течение 60 мин. Титрование комплемента сводится к определению одной 50%-ной гемолитической единицы - объема сыворотки, который содержит СН50. Для этого к различным дозам сыворотки прибавляют стандартное количество сенсибилизированных эритроцитов, а затем устанавливают объем сыворотки, при котором происходит 50%-ный гемолиз.

Степень гемолиза при титровании комплемента можно определять фотометрическими методами (с помощью спектрофотометра, фотоколориметра, нефелометра) или же визуально путем сравнения интенсивности гемолиза в опытных пробирках со стандартной шкалой лизированных эритроцитов.

2. Выявляют продукты активации С4а, СЗа, С5а и др.

3. Оценивают методом ИФА количество компонентов комплемента; норма в сыворотке крови в мг/л: C1q-190, Cls-120, С2-30, С4-430, C3-1300, С5-75, С6-60, С7-55, С8-60, С9-160, пропердин-25, фактор В-240, С1-ингибитор-180.

4. С помощью антител против C1q, меченных флюоресцеином выявляют отложения комплемента с иммунными комплексами в биоптатах тканей.

5. Определяют комплементсвязывающие рецепторы на лейкоцитах (CR1, CR2, CR3).

Характеристика системы тромбоиитов.

1.  Подсчитывают абсолютное количество в крови.

2. Оценивают способность к агрегации под влиянием неспецифических факторов и антигенов (при наличии адсорбированных антител).

3. Ставят тромбоцитопенический тест при введении аллергенов в организм.

4. Выявляют медиаторы, выделяемые тромбоцитами.