Специфические показатели иммунного статуса и методы их определения

(13 Голосов)
Рейтинг пользователей: / 13
ХудшийЛучший 

Для оценки специфических показателей используют 3 группы методов:

1. Методы определения антител различных иммуноглобулиновых классов (G, М, А, Е, D) к определенным антигенам.

2. Методы выявления иммунных Т-лимфоцитов, несущих рецепторы к определенному антигену.

3. Методы обнаружения антигенов.

Эти методы основаны на иммунных реакциях, которые ставят в лабораторных условиях. Есть 2 группы реакций: серологические (основаны на взаимодействии антигенов и антител) и клеточные, базирующиеся на взаимодействии антигенов с Т-клетками.

Серологические реакции для выявления антигенов и антител.

Данная группа иммунологических методов оказалась исключительно удобным средством как для исследования любых сложных смесей антигенов, так и для обнаружения антител к ним.

Первоначально эти методы были использованы для диагностики инфекционных болезней, а также в микробиологической практике. Высокая чувствительность и специфичность серологических реакций обусловили их широкое применение в биологии и медицине.

Краткий перечень наиболее часто используемых методик, а также диапазон их чувствительности, приведены в таблице 3.

Основные серологические реакции, используемые в иммунологии. Таблица 3.

МЕТОДЫ

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ, г/мл

Реакция преципитации

10-4-10-6

Реакция агглютинации

10-6 -10-7

Реакция связывания комплемента

10-6

Реакция пассивной гемагглютинации

10-7-10-9

Метод иммунной флюоресценции

10-7

Реакция коагглютинации

10-8 -10-9

Встречный иммуноэлектрофорез

10-6 - 10-7

Иммуноферментный и радиоиммунный анализ

10-9 и менее

Вестерк-блотинг

10-7-10-9

Данные реакции можно охарактеризовать как процесс взаимодействия антигенов с антителами, протекающий in vitro и имеющий ряд особенностей: потребность в электролитах, обратимость, двухфазность. Оптимальное специфическое взаимодействие антител с антигеном происходит в изотоническом растворе с рН, близким к нейтральному. Связь между антигеном и антителом в образовавшемся комплексе прочная, но обратимая. Комплексы антиген-антитело могут диссоциировать на составные компоненты без изменения свойств. Диссоциация усиливается при снижении рН до 2-3, повышении рН до 9.0 и более.

Реакции протекают в две фазы:

1. специфическая - фаза взаимодействия, в которой происходит комплементарное соединение активных центров антител и эпитопов антигена. Обычно эта фаза длится несколько секунд или минут;

2. неспецифическая - фаза проявления, характеризуется внешними признаками образования иммунных комплексов. Эта фаза может развиваться от нескольких минут до нескольких часов.

Реакции антиген-антитело в системе in vitro может сопровождаться возникновением нескольких феноменов - агглютинации, преципитации, лизиса. Внешние проявления реакции зависят от физико-химических свойств антигена (размеры частиц, физическое состояние), класса и вида антител (полные и неполные), а также условий опыта (консистенция среды, концентрация солей, рН, температура).

Поливалентность антигенов и антител обеспечивает возникновение видимых невооруженным глазом агрегатов. Это происходит в соответствии с теорией образования сетей, согласно которой к образовавшемуся комплексу антиген-антитело последовательно присоединяются другие молекулы антител и антигена, реагируя со свободными детерминантами и антидетерминантами. В результате формируются сетевые структуры, которые превращаются в агрегаты, выпадающие в осадок. Характер и выраженность реакции зависят от количественного соотношения антигенов и антител. Наиболее интенсивно реакции проявляются в том случае, если реагенты находятся в эквивалентном соотношении.

Агрегаты, способные выпадать в осадок, образуются при соединении антигенов с полными антителами. Неполные антитела (моновалентные) не вызывают образования сетевых структур и крупных агрегатов. Для выявления таких антител используют специальные методы, основанные на использовании антиглобулинов (см. реакцию Кумбса).

Серологические реакции, благодаря высокой специфичности и чувствительности, применяют для выявления и количественного определения антигенов и антител. Количество иммунореагентов в реакциях выражают титром - максимальным разведением сыворотки или антигена, при котором еще наблюдается реакция.

Для выявления неизвестного антигена (микроорганизма, белка и др.) используют диагностические иммунные антисыворотки, которые получают путем многократной иммунизации лабораторных животных соответствующими антигенами.

Обнаружение антител проводят с использованием известных антигенов - иммунодиагностикумов. Часто это взвесь известных убитых (инактивированных) микроорганизмов. Для инактивации используют высокую температуру, химические вещества (формалин, спирт, ацетон, фенол), ультразвук, ультрафиолетовые и рентгеновские лучи. При выделении из клеток различных антигенов используют методы разрушения, экстракции, обработку ферментами и различными детергентами, центрифугирование.